Cy3 TUNEL 细胞凋亡试剂盒-上海晅科生物科技有限公司

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Cy3 TUNEL 细胞凋亡试剂盒

2022-03-24

产品详情

产地上海
价格：1106
产品名称Cy3 TUNEL 细胞凋亡试剂盒查看相似产品 >

简介 YF®488/555/594/640/Cy3 TUNEL 细胞凋亡试剂盒产品说明书
YF®488/555/594/640/Cy3 TUNEL 细胞凋亡试剂盒
产品货号：
XK6067S
488 TUNEL 细胞凋亡试剂盒（绿色荧光）
20T
6013L 50T
6039S
555 TUNEL细胞凋亡试剂盒（橙红色荧光）
20T
0039L 50T
6014S
594 TUNEL 细胞凋亡试剂盒（红色荧光）
20T
6014L 50T
6063S
640 TUNEL 细胞凋亡试剂盒（远红荧光）
20T
6063L 50T
6067S
Cy3 TUNEL 细胞凋亡试剂盒
20T
6067L 50T
产品内容：
组分
规格
20T 50T
A. TUNEL Equilibration Buffer 2×1 mL 5 mL
B.488/555/594/640/Cy3 TUNEL Reaction Buffer 1 mL 2 × 1.25 mL
C. TdT Enzyme 20 μL 50 μL
D. Proteinase K (2 mg/mL) 40 μL 100 μL
E. DNase I (2 U/μL) 5 μL 13 μL
F. 10 × DNase I Buffer 100 μL 260 μL
储存条件
本产品应置于-20℃储存，组分B 需避光，避免反复冻
融。有效期见外包装。注：组分 A和 B 使用时请佩戴口罩、

手套，接触皮肤，请立即用大量水冲洗。

产品介绍
细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体 DNA 的降解，这种
降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的 DNA 片段为
180 bp-200 bp的整数倍，表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异
的梯状 Ladder 图谱。本试剂盒采用 TUNEL 法，应用末端
脱氧核糖核苷酸转移酶（ Terminal Deoxynucleotidyl
Transferase, TdT）在凋亡细胞中断裂 DNA 的 3′-OH 末端催
化掺入 YF®/Cy-dUTP， YF®/Cy-dUTP 标记的 DNA 可以用荧
光显微镜直接观察或者用流式细胞仪定量。TUNEL 法可以
选择性的检测凋亡细胞，而非坏死细胞或因辐照和药物
而造成的 DNA 链断裂的细胞。标记的 dUTP（如地-高辛
-dUTP、生物素-dUTP），可以直接进行原位检测，是一种
更快速、直接的检测手段。
使用方法
实验材料（自备）
? PBS缓冲液（pH~7.4）
? 4%多聚甲醛（PBS配制）
? 牛血清白蛋白（BSA）或正常的羊、牛血清
? 70%乙醇（自选）
? 脱蜡溶剂（石蜡切片样本）
实验步骤
1. 样本准备：
（1）细胞样品
a. 可选：准备一份阴性对照样本（加入不含TdT酶的TUNEL
反应液）。
b. PBS 清洗细胞两次。
c. 细胞固定：加适量4%多聚甲醛（pH 7.4）， 4℃放置 30 min，
d. PBS 清洗细胞两次。
e. 通透细胞：细胞可用配制于 PBS 中的 0.2% Triton X-100
溶液通透，室温放置 20 min。
f. PBS清洗细胞两次。
（2）石蜡组织切片
a. 室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片 2次，每次 5 min，以
脱掉石蜡。
注：二甲苯有毒，易挥发，请在通风橱中进行此操作。
b. 室温下，将样本浸没于无水乙醇中漂洗 2次，每次 5 min。
c. 室温下，将切片样本连续依次浸没在不同浓度梯度的乙
醇（95%、90%、80%、70%）中，每种浓度各漂洗 1 次，
每次 5 min。
d. 室温下，将切片浸没于纯水中漂洗 3 min，再将切片浸没
于1×PBS中漂洗3 min，用滤纸小心吸干切片样本周围液体。
e. 用免疫组化笔描绘样本轮廓，以便下游通透与标记。
f. 按 1: 100的比例，将 2 mg/mL 的蛋白酶 K 溶液用 1× PBS
稀释至终浓度 20 μg/mL，在每个样本上滴加 100 μL，使溶
液覆盖全部样本区域，室温孵育 20 min。（蛋白酶 K 的孵
育时间、温度需根据不同类型组织样本进行优化）。
注：蛋白酶 K 可以帮助渗透组织，时间短达不到通透效果，
但延长孵育时间可能导致切片脱落。一般情况下，厚度 4 μm
孵育 10 min，厚度 30 μm孵育 30 min。
g. PBS浸润清洗切片 2 次，每次5 min，用滤纸吸去多余的
液体，将处理好的样品放在湿盒中保持湿润。
注：这一步必须把蛋白酶 K 洗涤干净，否则会严重干扰后
续的标记反应。
（3）冰冻组织切片
a. 将冰冻切片放置于室温的片架上，室温 20 min，晾干。
b. 将载玻片浸没在 4%多聚甲醛溶液中，室温固定 30 min。
c. PBS浸润清洗切片 2次，每次 5 min。
d. 用滤纸小心吸干切片样本周围液体。
e. 按1: 100的比例，将 2 mg/mL 的蛋白酶 K 溶液用 1× PBS
稀释至终浓度 20 μg/mL，在每个样本上滴加 100 μL，使溶
液覆盖全部样本区域，室温孵育 20 min。（蛋白酶 K 的孵
育时间、温度需根据不同类型组织样本进行优化）。
注：蛋白酶 K 可以帮助渗透组织，时间短达不到通透效果，
但延长孵育时间可能导致切片脱落。一般情况下，厚度 4 μm
孵育 10 min，厚度 30 μm孵育 30 min。
f. PBS 浸润清洗切片 2 次，每次 5 min，用滤纸吸去多余的
液体，将处理好的样品放在湿盒中保持湿润。
（4）阳性处理（仅阳性对照进行此步骤，其他样品直接进
行 TUNEL反应步骤）
a. 按1: 10的比例用ddH2O将10× DNase I Buffer稀释成1×
DNase I Buffer 备用。
b. 滴加 100 μL 1× DNase I Buffer 到已通透的样本上，覆盖
全部样本区域，室温平衡 5 min。
c. 用 1× DNase I Buffer 以 1: 100稀释 DNase I (2 U/μL)至终
浓度 20 U/mL的工作液。
d. 轻轻吸掉多余液体，加入 100 μL 浓度为 20 U/mL 的
DNase I 工作液，室温孵育10 min。
e. 轻轻吸掉多余液体，PBS清洗样品 2次。
2. TUNEL 反应
（1）每个样本加入 100 μL TUNEL Equilibration Buffer，室
温孵育 5 min。
（2）预先配制 TUNEL 反应混合液：每 50 μL TUNEL
Reaction Buffer 中加入 1 μL TdT 酶。
（3）弃去 TUNEL Equilibration Buffer，每个样本加入 50 μL
TUNEL 反应混合液。
a. 贴壁细胞，用盖玻片使缓冲液均匀覆盖样本。37℃避光
孵育 60 min。
b. 悬浮细胞，可加入微孔板中，采用微孔板振荡器进行孵
育或每隔 15 min 温和的震荡反应管，使之充分反应。37℃
避光孵育 60 min。
c. 组织样本，用盖玻片使缓冲液均匀覆盖样本。将样本平
放于湿盒内，37℃恒温箱孵育2 h（湿盒底部铺一张含少量
水的纸巾保持湿度）。
（4）去掉反应液，在 1× PBS 的染色缸中浸泡润洗2 次，每
次 5 min。再使用适量配制于 PBS中的 0.1% Triton X-100，
其中含 5 mg/mL BSA 的缓冲液清洗样本 3次，每次 5 min，
以降低背景。
（5）（可选）复染：每个样本滴加浓度为 2 μg/mL 的DAPI
染液，室温避光孵育 10 min。染色完成后，去掉染液，并将
样本在 1× PBS中浸泡润洗 3次，每次 5 min。
（6）（可选）石蜡切片封片：将切片依次在纯水、70%乙
醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇中浸没 5 min，
将切片样本置于染色缸中以新鲜的二甲苯浸泡，透明化
处理 2次，每次 5 min。脱水完成后，擦去切片周围的液体，
每个样本滴加 50 μL 抗荧光淬灭封片液，盖上盖玻片，用镊
子的钝端轻轻敲击盖玻片，去除气泡以使封片完全。
（7）用荧光显微镜或流式细胞仪观察。（凋亡细胞应被标
记上明亮的荧光，没有加入 TdT 酶的阴性对照样本不能被
标记上荧光）。
注意事项 : 本产品仅用于科研
1. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注
意避光，以减缓荧光淬灭。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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本产品仅用于科研

488/555/594/640/Cy3 TUNEL 细胞凋亡试剂盒

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