647A Click-iT EdU 成像试剂盒（远红荧光）产 品 说 明 书
647A Click-iT EdU 成像试剂盒（远红荧光）
产品货号及规格：
XK6018S
 488 Click-iT EdU成像试剂盒（绿色荧光）
20T
C6015M 100T
C6015L 500T
C6015XL 1000T
C6016S
 555 Click-iT EdU 成像试剂盒（橙红色荧光）
20T
C6016M 100T
C6016L 500T
C6016XL 1000T
C6017S
YF® 594 Click-iT EdU 成像试剂盒（红色荧光）
20T
C6017M 100T
C6017L 500T
C6017XL 1000T
C6018S
647A Click-iT EdU成像试剂盒（远红荧光）
20T
C6018M 100T
C6018L 500T
C6018XL 1000T
产品内容：
组分 规格 20T 100T 500T 1000T 开封后保存温度 稳定性
A. 10 mM EdU 40 μL 0.2 mL 1 mL 2× 1 mL -20℃
开封后按指-定
温度保存可有
效放置一年
B. 488/555/594/647A Azide 4 μL 20 μL 100 μL 200 μL -20℃，避光
C. 10× Click-iT EdU 反应缓冲液 200 μL 1 mL 5 mL 10 mL 2-8℃
D. CuSO4 100 μL 0.5 mL 2× 1.25 mL 5 mL 2-8℃
E. Click-iT EdU 缓冲液添加物 6 mg 30 mg 150 mg 2 × 150 mg 2-8℃
F. Hoechst 33342 5 μL 25 μL 125 μL 250 μL 2-8℃
规格：上述反应次数针对 96孔板培养的细胞，不同容器的具体用量可参考附表 1。
荧光光谱数据：YF® 488 Azide：495/519 nm；YF® 555 Azide：555/565 nm；YF®594 Azide：590/617 nm
YF® 647AAzide：650/670 nm；Hoechst 33342：350/461 nm（bound to DNA）
储存条件
-20℃避光保存，有效期见外包装。开封后，保存温度详见
说明书。
产品介绍
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、 遗传毒性及抗肿瘤
药物效果的基础实验手段。检测细胞增殖最 的方法是
BrdU法。EdU法检测试剂盒是BrdU法的革命性突破。EdU
（5-乙炔基-2’-脱氧尿苷）是一种嘧啶类似物，在DNA合成
期整合入DNA双链。EdU法检测基于“点击”反应，一种由铜
催化的叠氮化合物和炔烃作用发生共价反应，形成共价键。
本试剂盒中，EdU含有炔烃，YF® 488/555/594/647A
Azide染料含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有
效，易于使用。BrdU方法需要DNA变性（如酸变性、热变
性或者用DNase消化）暴露出BrdU，从而方便BrdU抗体结
合；而EdU法只需标准化的多聚甲醛固定和Triton X-100促
渗就可以使检测试剂进入细胞， 只需少量的叠氮化染料即可
非常有效地标记出整合的EdU。
本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分，可以用于
体外培养细胞的增殖检测。

使用方法
实验材料（自备）
? 10 mM PBS, pH 7.2-7.6
? 4 %多聚甲醛固定液（in PBS）
? 促渗试剂（0.5 %Triton X-100 in PBS）
? 2 mg/mL 甘氨酸溶液（in ddH2O）
? 3 %BSA in PBS, pH 7.2-7.6
实验步骤
1. EdU标记细胞
（1）以每孔4×103
-1×105
细胞接种于96孔板中，培养至正常
状态后进行药物处理或其他刺激处理。
（2）培养基稀释 10 mM EdU至合适浓度，阴性对照组不用
EdU处理。
注：EdU 的标记浓度需根据细胞类型加以调整，建议以 10
μM的初始浓度进行摸索。预实验中，建议设置 EdU浓度梯
度，可参考附表 2和附表 3。
（3）细胞培养箱中孵育一段时间。
注：EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育（<2 h）宜采用
高浓度，如：10~50 μM；长时间孵育（>24 h）宜采用低浓
度，如：1~10 μM；也可参考附表 3。
2. 细胞固定及促渗
（1）孵育完成后，去除培养基。加入50 μL 4 % 多聚甲醛
固定液，室温孵育15-30 min后，去除固定液。
（2）每孔加入50 μL 2 mg/mL甘氨酸溶液，室温孵育5 min，
中和残留的固定液。
（3）以每孔100 μL 3 % BSA洗涤细胞2次。
（4）去除洗涤液，加入100 μL 0.5 % Triton X-100，室温孵
育20 min。
（5） 去除促渗剂， 每孔100 μL的 3% BSA 洗涤液洗涤 2次。
3. EdU检测
注：本参考步骤每个样本使用100 μL的工作液，用户可以根
据自己的样本情况调整用量。
（1）配置1× Click-iT EdU反应缓冲液（组分C）：用ddH2O
将组分C稀释10倍。
（2）配置5× Click-iT EdU缓冲液添加物 （组分E） ： 加300 μL
的ddH2O至30 mg的E组分管中（终浓度100 mg/mL），混匀
至全部溶解。使用后，剩余储液存放在-20℃，可保存一年，
溶液一旦呈现棕色，则说明有效成分降解不能再用。
注：不同规格的组分E均按照此比例加ddH2O溶解，制备成
5× 储液备用。
（3）准备1× Click-iT EdU缓冲液添加物：用ddH2O稀释5×
Click-iT EdU缓冲液添加物至1×，溶液应现配现用。
（4）依据表 1准备 Click-iT工作液。
表1: Click-iT 工作液
反应组分 以10个孔的
样本数为例
1× Click-iT EdU反应缓冲液 860 μL
CuSO4 （组分 D） 40 μL
YF® 488/555/594/647AAzide（组分B） 2 μL
1× Click-iT EdU缓冲液添加物 100 μL
总体积 1 mL
（5）每孔加入 100 μL Click-iT工作液，均匀覆盖细胞。
（6）室温避光孵育 30 min。
（7）除去 Click-iT 工作液，以 100 μL 3% BSA 洗涤细胞 2
次后， 去除洗涤液。 如其他无特别要求， 即可进行拍照分析。
4. DNA 复染（可选）
（1）用 100 μL PBS洗涤细胞 1次，去除洗涤液。
（2）用 PBS将 Hoechst 33342（组分 F）稀释 2000倍。
（3）每孔加 100 μL 1× Hoechst 33342溶液，室温避光孵育
15-30 min。
（4）去除 Hoechst 33342 溶液，用 100 μL PBS 洗涤细胞 2
次。
5. 成像及分析
附录：
附表 1.EdU 培养基及染色反应液的参考使用量
96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板 5.5 cm小皿
EdU培养基 100 μL 150 μL 200 μL 500 μL 1 mL 2 mL
染色反应液 100 μL 150 μL 200 μL 500 μL 1 mL 2 mL
附表 2. EdU 的参考孵育时间
细胞系 人胚胎细胞 酵母细胞 鼠成纤维细胞 人宫颈癌细胞 人胚肾细胞系 人神经细胞
细胞周期 ~30 min ~3 h ~18 h ~21 h ~25 h ~5 d
孵育时间 5 min 20 min 2 h 2 h 2 h 1 d
注：（1）EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的 1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用 2 h孵育时间；
（2）考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响，细胞周期会有所变化。
附表 3. 文献中EdU 孵育浓度及时间
PubMed ID Reference Cell Line Concentration Time
18272492 Salic A,et al.PNAS.2008 NIH3T3,Hela 10 nM~10 μM 1 h
18521918 Cappella P, et al. Cytometry A.2008 HL-60,A2780,U2OS 1~10 μM 0.5 h
18996411 Chehehasa F, et al.Neurosci Methods.2009 Neurospheres 1~20 μM 24 h
19179371 Limsirichaikul S, et al.Nucleic Acids Res.2009 Primary fibroblasts 10 μM 1,2,4 h
19253396 Warren M, et al. Dev Dyn.2009 Chick embryos 10 μM~2 mM 4 h
19647746 Yu Y, et al. J Immunol Methods.2009 Spleen cells 50 μM 24 h
19544417 Momcilovic O, et al.Stem Cells.2009 Human ES cells 10 μM 0.5 h
20080700 Cinquin O, et al. PNAS.2010 emb-30 1 μM 12 h
20025889 HanW, et al. Life Sci.2009 VSMC 50 μM 2 h
20659708 Huang C, et al. J Genet Genomics.2010 ESC 50 μM 2 h
21310713 Hua H, et al. Nucleic Acids Res.2011 Fission yeaststrains 10 μM 3 h
20824490 Lv L, et al.Mol Cell Biochem.2011 EJ cells 50 μM 4 h
21248284 Yang S, et al.Biol Reprod.2011 GC cells 50 μM 2 h
21227924 Zhang YW, et al. Nucleic Acids Res.2011 U2OS, HT29 30 μM 1.5 h
21829621 Guo T, et al.PloS One. 2011 HIT-T15 50 μM 4 h
21980430 Zeng T, et al.PloS One. 2011 MCF-10A 25 μM 2 h
22012572 Ding D, et al.Int Orthop.2011 C3H10T1/2 10 μM 24 h
22000787 ZengW, et al. Biomaterials.2011 EPC 50 μM 4 h
21913215 Xue Z, et al. J Cell Biochem.2011 SGC7901 25 μM 24 h
22016038 Peng F, et al.Lasera Med Sci.2011 MSC 50 μM 2 h
21878637 Li D, et al. J Biol Chem.2011 HCC 50 μM 2 h
本产品仅用于科研

647A Click-iT EdU 成像试剂盒（远红荧光）