YF®350/488/555/594/640/生物素酪胺信号放大试剂盒 产品说明书
YF®350/488/555/594/640/生物素酪胺信号放大试剂盒
产品规格：50 slides, 200 slides
产品货号：XK6100S
产品内容：
表 1: 组分名称、编号及体积
组分编号 组分名称 组分体积
50 slides 200 slides
见表 2 Tyramide Stock Solution, 200× 25 μL 100 μL
见表 2 HRP-conjugated 25 μL 100 μL
60011 BSA 0.5 g 2 g
60012 1× Tyramide Amplification Buffer 5 mL 20 mL
表 2: 试剂盒组分编号
标记染料 Ex/Em
HRP-conjugated YF®/Biotin
Tyramide Goat anti-mouse IgG Goat anti-rabbit IgG Streptavidin
YF®350 347/448 60008 60009 60010 60001
YF®488 490/515 60008 60009 60010 60002
YF®555 555/565 60008 60009 60010 60003
YF®594 590/617 60008 60009 60010 60004
YF®640 642/662 60008 60009 60010 60005
Biotin（生物素） ~ 60008 60009 60010 60007
储存条件
-20℃避光保存，有效期见外包装。
产品介绍
酪胺信号放大技术（Tyramide Signal Amplification）又
称催化信号放大技术（Catalyzed Signal Amplification），是
一类利用HRP对靶抗原进行高密度原位标记的酶学检测方
法， 其不但可以用于IF/IHC的信号放大， 亦可用于Elisa、 ISH
等检测。
酪胺信号放大技术可以用于检测用传统方法无法检出
的低丰度靶标。 基于酪胺的信号放大技术能够提供极强的灵
敏度、检测极微量的目的抗原。酪胺信号放大技术极大的降
低抗体的用量，节约抗体。酪胺信号放大试剂盒可与传统染
色方法结合使用以多色成像， 也可以顺序进行两个或更多个
酪胺反应以标记一个样品上的不同靶标。

使用方法
自备试剂：
? 1× PBS
? 4%多聚甲醛（in PBS）
? 促渗试剂（0.5% Triton X-100 in PBS）
? 0.1 M柠檬酸钠缓冲液（pH 6.0）
? 30%过氧化氢
? 封闭缓冲液：1 g BSA溶于100 mL含0.5% Triton X-100
的PBS中，或选择市面上在售封闭缓冲液。
下列组分仅用于 Biotin-Tyramide 试剂盒中：
? 生物素封闭清洗缓冲液：含1% BSA和0.05% Tween 20
的PBS
? 未标记的链霉亲和素溶液：含0.1 mg/mL链霉亲和素的
生物素封闭清洗缓冲液
? 生物素溶液：含0.5 mg/mL生物素的生物素封闭清洗缓
冲液
? 以下步骤，每个样品使用100 μL染色液（足以覆盖96
孔板的一个孔或约1 cm2
的组织部分）。可以根据不同
的样本尺寸增加或减少染色液用量。
1. 样本准备
（1）细胞样品
a. 可选：准备一份阴性对照样本（不孵育一抗的样本）。
b. 1× PBS清洗细胞两次。
c. 细胞固定：加入适量 4%多聚甲醛（pH 7.4）溶液，4℃放
置 15 min。
d. 1× PBS清洗细胞两次。
e. 通透细胞：加入促渗试剂，室温放置10 min。
f. 1× PBS清洗细胞两次。
（2）石蜡组织切片
a. 将石蜡切片放置在 60℃的烘箱中 30 min。
b. 室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片 2次， 每次5 min，以
脱掉石蜡。
注：二甲苯有毒，易挥发，请在通风橱中进行此操作。
c. 室温下， 将切片浸没于无水乙醇中漂洗2 次， 每次 5 min。
d. 室温下， 将样本连续浸没在不同浓度的乙醇 （95%、 90%、
80%、70%）中，每种浓度漂洗1 次，每次5 min。
e. 室温下，将切片浸没于纯水中 3 min，再将切片浸没于 1×
PBS中 3 min，用滤纸吸干多余液体。
f. 用免疫组化笔描绘样品轮廓，以便下游通透与标记。
g. 抗原修复：将0.1M 柠檬酸钠缓冲液（PH 6.0），用微波
炉加热至沸腾，将切片置于缓冲液中，间断煮沸 10 min。注
意：此过程中，组织要一直浸没于缓冲液中，以保证组织的
抗原修复效果。抗原修复后，取出切片于室温中逐渐降温。
注：需根据不同的样本选择不同的抗原修复方法。
h. 1× PBS 清洗两次。
2.（可选）内源性过氧化物酶灭活
如需要，可加入足够量的3%过氧化氢覆盖样品并在室
温孵育 60 min，淬灭样品的内源性过氧化物酶活性。
3.（可选）内源性生物素阻断
进行链霉亲和素/生物素检测时，建议阻断样品中的内
源性生物素以减少背景。YF®染料标记的酪酰胺和 HRP 标
记的二抗，可省略此步骤。
（1）室温下，将样品与未标记的链霉亲和素溶液混匀后孵
育 15 min 后，用生物素封闭清洗缓冲液将样品在室温下洗
涤 3次，每次 5 min。
（2）室温下，将样品与生物素溶液混匀后孵育 30 min，以
封闭链霉亲和素上多余的生物素结合位点。 用生物素封闭清
洗缓冲液洗涤样品 3次，每次 5 min。
4. 免疫标记
（1）封闭：用封闭缓冲液室温封闭1 h。
（2）用封闭缓冲液将一抗稀释至适当浓度。将样品与一抗
在室温下孵育 1 h或 4℃过夜。
注：如果使用含有 HRP – Streptavidin 的试剂盒，请使用生
物素偶联的一抗。
（3）室温下 1× PBS洗涤 3次，每次 5 min。
（4）用封闭缓冲液将 HRP-conjugated 以 1:200 稀释，室温
孵育 1 h。
（5）室温下 1× PBS洗涤 3次，每次 5 min。
（6）用 1× Tyramide Amplification Buffer 将 Tyramide Stock
Solution, 200×以 1:200稀释，每个样品加 100 μL，室温孵育
10 min。稀释后的染色液可在室温下避光保存 24 h。
（7）室温下 1× PBS洗涤 3次，每次 5 min。
（8）可选：如果使用 Biotin-酪酰胺试剂盒，可使用荧光标
记的链霉亲和素进行荧光显色，也可使用含 HRP 的链霉亲
和素标记，后使用 DAB 显色。
（9）显微镜成像。对于载玻片上的组织样本，请盖上盖玻
片并密封后成像。
5. 多色标记
细胞样本：可在“免疫标记”步骤（8）后使用不同于
步骤（2）中种属来源的一抗以及与 种荧光酪胺光谱兼
容的荧光标签重复免疫标记步骤（1）~（8）。
组织样本：经再次抗原修复（方法同石蜡组织切片抗原
修复步骤）和 1×PBS 清洗两次后，可在“免疫标记”步骤
（8）后使用另一靶标的一抗（与前一靶标相同或不同种属
来源均可）以及与 种荧光酪胺光谱兼容的荧光标签，重
复免疫标记步骤（1）~（8）。
注意事项
1. 1×Tyramide Amplification Buffer 使用后，建议小量分
装，-20℃保存，避免反复冻融。
2. 与荧光二抗相比，Tyramide 试剂盒显示出更高的灵敏度
和更强的信号，因此，实验时一抗的使用浓度较低，建议梯
度设置一抗浓度以找到 浓度。
3. 建议设置未孵育一抗的阴性对照，确保阴性对照在孵育
和洗涤过程中没有被阳性样品中的试剂交叉污染。 对于组织
样品，建议对未染色的对照（不添加抗体或酪酰胺）进行成
像，确定组织是否有自发荧光，排除对背景的影响。
4. 建议使用 5 μg/mL 的HRP 结合物，降低浓度可能会影响
信号强度和灵敏度。
5. 建议 1:200稀释 YF®/Biotin-Tyramide。 较高的浓度可能会
导致信号过强或背景高，建议从 1:100到 1:1000梯度稀释。
6. 可依次使用多个 YF®/Biotin-Tyramide 来标记同一样品的
不同靶标， 每次酪酰胺反应后需进行 HRP 淬灭或抗体剥离。
本产品仅用于科研

YF®350/488/555/594/640/生物素酪胺信号放大试剂盒