Sulfo-Cy3-E-dUTP（磺酸基-Cy3-乙基-dUTP）产品说明书 
Sulfo-Cy3-E-dUTP（磺酸基-Cy3-乙基-dUTP） 
产品规格：25 nmole 
产品货号：XK0048
应用范围：荧光标记染料 
 产品参数 
Ex/Em：548/565 nm 
分子式：C43H53N5Na3O21P3S2 
分子量：1201.9 
消光系数：162,000 
分子结构图： 
 
 
储存条件 
-20℃避光保存，有效期见外包装，可以采用 pH 7.4 的 10 
mM Tris 溶解后，分装保存，避免反复冻融。 
 
使用方法 
DNA 标记 
1. 试剂（自备） 
（1）Taq DNA聚合酶 
（2）10× Taq reaction buffer 
（3）25 mM MgCl2 
（4）dATP，dTTP，dCTP，dGTP（单独溶液），1 mM each 
（5）DNA模板 
（6）正向、反向引物，10 μM each 
（7）PCR 清洁试剂盒 
2. PCR反应 
（1）按照表 1 反应体系配制PCR 反应混合液： 
（2）每个反应管加 1 μL 1 mM Sulfo-Cy3-E-dUTP 
注：阴性对照管，加1 μL 1mM dTTP代替Sulfo-Cy3-E-dUTP。  
（3）按照表 2 程序运行PCR反应 
注：a  热变性时间依据不同的 Taq 酶进行调整 
b  退火温度设置：Tm - 5℃ 
c  延伸时间根据扩增片段大小而定，一般 200-300 bp 片
段设为 1 min 即可。 
（4） 可选步骤， 用PCR 清洁试剂盒去除未掺入的单核苷酸。  
表 1. PCR反应体系 
组分  体积  终浓度 
10×Taq reaction buffer  2 μL  1×  
25 mM MgCl2  2 μL  5 mM 
1 mM dATP  2 μL  100 μM 
1 mM dCTP  2 μL  100 μM 
1 mM dGTP  2 μL  100 μM 
1 mM dTTP  1 μL  50 μM 
10 μM 正向引物  1 μL  500 nM 
10 μM 反向引物  1 μL  500 nM 
模板  1 ng  50 pg/uL 
Taq  1 U  0.05 U/μL 
dH2O  up to 19 μL   
表 2. PCR反应条件 
94℃ 2 min 
①  Hold 
94℃ 30 sec  30 个循环  
50-60℃ 30 sec 
② 
72℃ 1 min 
③ 
72℃ 5 min  Hold 
（5）取 10%的PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳（凝胶不加入
DNA染料），检测 PCR 反应的效率和特异性，通过紫外凝
胶成像仪或激光凝胶扫描仪观察。 
注：凝胶染色前先观察染料的荧光，以免与下一步的凝胶染
料发生荧光淬灭。 
（6）采用后染法，使用 DNA 凝胶染料对凝胶进行染色， 
观察总的PCR 产物或阴性对照组的PCR 扩增产物。 
TUNEL 法检测细胞凋亡 
注：我司提供了一系列染料的 Cy Dye TUNEL Assay Kits，
其中试剂盒成分包括：平衡缓冲液、Cy dye TUNEL反应缓
冲和 TdT酶。 
1. 试剂（自备） 
（1）PBS，pH 7.4 
（2）4%多聚甲醛（in PBS） 
（3）70%乙醇（可选） 
（4）0.2% Triton™ X-100 in PBS 
（5）0.1% Triton™ X-100 in PBS/5 mg/mL bovine serum 
albumin（BSA） 
（6）12.5 U/μL末端脱氧核糖核苷酸转移酶（TdT） 
（7）5×TdT反应缓冲液：1 M二甲基胂酸钾，125 mM Tris-
HCl，1.25 mg/mL BSA，pH 6.6 
（8）25 mM CoCl2溶液 
（9）100 μM dATP 
2. 样品准备 
（1）细胞或新鲜冷冻组织切片的准备 
a.  准备一份不含 TdT酶的样品作为阴性对照。（可选步骤） 
b.  用PBS 清洗细胞或者组织切片两次。 
c.  向上述细胞或组织切片中加入 4%多聚甲醛，4℃孵育 30 
min。 
d. 用 70%乙醇重悬细胞，-20℃可储存两周。（可选步骤）  
e.  用PBS 清洗两次。 
f.  促渗加入适量的 0.2% Triton™ X-100 的PBS 溶液，室温
孵育 30 min。 
g.  用PBS 清洗两次。 
（2）石蜡组织切片的准备 
a.  准备一份不含 TdT酶的样品做阴性对照。（可选步骤） 
b.  根据标准步骤进行脱蜡或水化处理。 
c.  用PBS 清洗两次。 
d.  用20 μg/mL蛋白酶 K( in PBS)促渗，处理组织，37℃孵
育 30 min。根据组织类型，蛋白酶 K 的孵育温度和时间可
相应的变化。 
e.  用PBS 清洗两次。 
3. 反应混合液准备 
（1）用去离子水将 Sulfo-Cy3-E-dUTP 稀释成10 μM。 
（2）每个样品准备 100 μL TUNEL平衡缓冲液： 
20 μL 5 × TdT反应缓冲液 
20 μL 25 mM CoCl2 
60 μL dH2O 
（3） 每个样品准备50 μL TUNEL反应混合液，如下表所示： 
组分  体积  最终浓度 
5×TdT reaction buffer  10 μL  1×  
25 mM CoCl2  10 μL  5 mM 
100 μM dATP  2.5 μL  5 μM 
10 μM Sulfo-Cy3-E-dUTP  2.5 μL  0.5 μM 
12.5 U/μL TdT  1 μL  12.5 U/reaction 
dH2O  24 μL   
总体积  50 μL   
4. TUNEL 染色 
（1） 向样品中加入 100 μL平衡缓冲液，室温下孵育 5 min。 
注：对于贴壁细胞或者组织切片，用石蜡盖玻片覆盖样品，
使缓冲液均匀覆盖样品。 
（2）去除平衡缓冲液，另外加入 50 μL反应缓冲液 
注意：对于贴壁细胞或者组织切片，用盖玻片覆盖样品，使
缓冲液均匀覆盖组织。 
（3） 37℃避光孵育 60 min。组织切片需 37℃避光孵育 2 h。 
注：a.  对于细胞或组织切片，孵育需在潮湿环境下进行。 
b.  对于悬浮细胞，孵育需在摇床上进行，或者在孵育的 
过程中，每隔 15 min，轻轻的摇晃一下反应液。 
（4）用PBS、0.1% Triton X-100 或 5 mg/mL BSA清洗样品
三次，每次 5 min。 
（5）如需要，可进行样品复染。采用荧光显微镜或者流式
细胞仪观察。TUNEL 标记的细胞的细胞核显示出明亮的荧
光。不含 TdT酶的对照组可观察到细胞未被标记上荧光。 
注意事项 
1.  该产品推荐贮存浓度为10 mM，-20℃条件下至少可以保
存一个月。 
2.  荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光
淬灭。 
3.  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅用于科研

Sulfo-Cy3-E-dUTP（磺酸基-Cy3-乙基-dUTP）