Sulfo-Cy5-E Maleimide（磺酸基-Cy5-乙基马来酰亚-胺）产品说明书 
Sulfo-Cy5-E Maleimide（磺酸基-Cy5-乙基马来酰亚-胺） 
产品货号：XK0068
产品规格：1 mg
应用范围：荧光标记染料、巯基标记染料 
 产品参数 
外观：可溶于水、DMSO 或 DMF 的黑绿色固体 
Ex/Em：647/665 nm 
分子式：C39H46N4O9S2 
分子量：778.9 
消光系数：271,000 
效能等同于：Alexa Fluor 657，TRITC，DyLight 640 等 
分子结构图： 
 
 
储存条件 
-20℃避光保存，有效期见外包装。 
 产品介绍 
花菁染料 Sulfo-Cy5-E 是一种远红外荧光标记染料，该
染料具有高度亲水性和水溶性，含有游离的、未活化的单官
能团羧酸。而 Sulfo-Cy5-E Maleimide 是 Sulfo-Cy5-E 染料的
硫醇反应形式。Maleimide 与硫醇基团反应形成硫醚偶联产
物。反应可以在 pH=7 的胺中进行。在中性 pH 环境中，
Maleimide 基团不与组氨酸或精氨酸反应。 
菁染料是性能优良的荧光染料，摩尔吸光系数在荧光染
料中是无可比拟的，其琥珀酰亚胺酯是常用的脂肪氨基标记
试剂，广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和
检测。通过改变次甲基链的长度，可改变其荧光发射波长，
每增加一个双键，按照 Huoffman 规则正好红移约 100 nm。  
水溶性菁染料 Cy3 和 Cy5 已成为基因芯片的普遍荧光
标记物；另外，Cy5，Cy5.5 和 Cy7 的吸收在近红外区背景
非常低，是荧光强度较高、稳定性较好的长波长染料。特别
适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。 
 
使用方法（以标记IgG抗体为例） 
1. 实验材料 
（1）无水 DMSO 
（2）10-100 mM 磷酸盐（例如 PBS），Tris 或 HEPES 缓冲
液，pH 7.0-7.5 
（3）交联葡聚糖 G-25 
（4）（可选）用 Tris-(2-carboxyethyl) phosphine（TCEP）还
原蛋白质中二硫键以产生游离巯基。 
（5）NaN3 
（6）BSA 
2. 标记方法和步骤 
（1）准备标记抗体 
a.  在室温下，将抗体溶于缓冲液中，使终浓度为 50-100 μM
（IgG为 7.5-15 mg/mL）。 
b.  任选步骤：如果要让蛋白质中的二硫键释放出更多的硫
醇基团，则可以在此阶段加入约10倍摩尔数的过量的TCEP。
将反应溶液孵育约 30 min。还原反应和随后的标记反应
在惰性气体（N2或 Ar）存在下进行，以防止二硫键重新形
成。  
（2）准备染料储备液 
取出 Sulfo-Cy5-E Maleimide 染料，恢复至室温。制备
10 mM 染料储液。对于 1 μmol 染料：向小瓶中加入 100 μL
无水 DMSO 即可。短暂涡旋，完全溶解染料，然后进行短
时间离心，使染料集中于管子底部。 
注： a.  如果要用少量的蛋白质进行标记反应，染料储备溶液
可能需要稀释至更低浓度，以保证量取体积的准确性。 
b.  未使用的储液可避光、干燥储存于-20℃，以备后续 
使用。如果使用无水 DMSO 制备溶液，染料可稳定至少一
个月。 
c.  染料储备溶液也可以用 ddH2O 或含水缓冲液中制备。
然而，因为染料会随着时间的推移而水解，所以水溶性的储
存液需要现配现用，不能保存后再使用。 
（3）标记反应步骤 
a.  在搅拌或涡旋蛋白质溶液的同时，加入一定量的染料储
备溶液，以产生染料、蛋白摩尔比为 10-20 的混合液。例如，
对于 50 μM 的 IgG，应添加染料至染料最终浓度为 0.5-1 mM。  
b.  在室温下避光搅拌反应2h或 4℃过夜。 
注：进行标记反应的同时，进行步骤（4）a制备葡聚糖柱。 
（4）从反应液中分离标记蛋白 
a.  用 PBS 缓冲液（pH~7.4）平衡葡聚糖柱（10 mm × 300 
mm）。 
b.  将步骤（3）b 中的反应溶液装载到柱上，并用 PBS 缓冲
液洗脱柱。从柱中洗脱的 条带对应于抗体缀合物。 
注：对于小规模的标记反应，为了避免产物过度稀释，可以
使用超滤装置去除结合物中游离染料。10K 超滤管可用于 
IgG蛋白；具有不同分子量的蛋白需要不同的超滤管。 
 
3. 确定 DOL 
（1）确定蛋白浓度 
染料标记的抗体浓度可通过以下公式计算: 
C(mg/mL) = {[A280 -(Amax × Cf)]/1.4} ×  稀释因子。 
a. C 是指实验收集的 YF 标记的抗体浓度； 
b.  稀释因子是指在吸光度测量时的稀释倍数； 
c. A280和Amax分别是指在280nm处的吸光度以及在 吸收
波长(~647nm)处的吸光度； 
d. Cf  是校正因子，Sulfo-Cy5-E Maleimide的Cf值为0.13； 
e. 1.4则是指IgG的消光系数； 
注：过柱洗脱的蛋白溶液直接用于吸光度检测可能浓度过大，
因此需要稀释到大约0.1 mg/mL。稀释倍数（即稀释因子）
需要从起初抗体数量（比如5 mg）以及收集的洗脱蛋白液的
体积来进行预估。 
（2）DOL的估算 
DOL通过下式计算: 
DOL = (Amax × Mwt ×  稀释因子)/(ε × C) 
a. Amax，稀释因子，C值在3.1中已经明确； 
b. Mwt是指IgG的分子量（~150,000）； 
c. ε是Sulfo-Cy5-E Maleimide的摩尔吸光系数。 
 
注意事项 
1. 产物如需长期储存，我们建议添加BSA和NaN3，并使其
终浓度分别为5-10 mg/mL和0.01-0.03%，以防变性和微生物
污染。 
2.  标记好的抗体溶液应4℃避光保存，如果加入终浓度为50%
的甘油，则可储存在-20℃， 在这些条件下，产物可稳定保存
一年或更长时间。 
本产品仅用于科研

Sulfo-Cy5-E Maleimide（磺酸基-Cy5-乙基马来酰亚-胺）