532 Antibody Labeling Kit（532抗体标记试剂盒）产品说明书
532 Antibody Labeling Kit（532抗体标记试剂盒）
产品货号：XK601107S
产品规格：S, M, L
产品内容：
组分 S6011S (5-20 μg) S6011M(20-50 μg) S6011L (50-100 μg)
A: Dye vial 1 vial 1 vial 1 vial
B: Super-n-stain® reaction buffer, 10 × 1 vial of 15 μL 1 vial of 15 μL 1 vial of 30 μL
C: Super-n-stain® antibody storage
buffer
1 vial of 60 μL 1 vial of 150 μL 1 vial of 300 μL
D: Ultrafiltration vial (MWCO=10K) 1 each 1 each 1 each
储存条件
-20℃保存，有效期见外包装。
产品应用
Super-n-stain® 抗体标记试剂盒包含您需要的利用本公
司 YF 染料或生物素（Biotin）迅速标记抗体的所有组分。
标记过程只需将抗体和染料简单混合于试剂盒内提供的反
应缓冲溶液中，进行短时间的孵育即可。Super-n-stain® 染
料在标记结束时不再反应，因此无需进一步纯化步骤。标记
后，约 4-6分子染料与1分子抗体共价结合。Super-n-stain®
是共价标记，所以用它标记的抗体可以用于多色荧光染色，
而不会发生抗体间的染料转移现象。
Super-n-stain® 标记可以兼容 NaN3、 低浓度的甘油、 Tris
和甘氨酸。 试剂盒里提供的微型超滤离心管可以在标记前快
速去除不兼容的小分子抗体稳定剂。
标准 Super-n-stain® 标记步骤可以用于多于 IgG (μg) 4
倍的 BSA 或明胶样品。根据您希望标记的 IgG 量来选择试
剂盒大小。优化标记步骤适用于稳定蛋白质过剩或腹水的
IgG 样品。在这种情况下，根据需要标记抗体样本的蛋白质
总量（IgG + 稳定剂，或腹水中总蛋白量）来选择试剂盒大
小。优化步骤也可用于标记 IgG 量低于 范围的样品，通
过添加稳定剂蛋白使总蛋白量达到试剂盒的标记范围。 优化
步骤不建议用于标记天然抗血清或杂交瘤细胞株培养上清，
因为这些样本的抗体含量相对于总蛋白非常低。
当用荧光标记抗体直接进行免疫荧光时， 您可能需要使
用更高浓度的抗体来实现类似间接免疫荧光法检测 （一抗加
标记二抗）染色的强度。在我们的内部测试中发现，间接免
疫荧光染色结果是直接免疫荧光染色信号的三倍左右。
标记二抗仍可以连接到使用Super-n-stain® 试剂盒标记
的一抗上， 因此如果多个来自同一物种的抗体用于多色免疫
荧光染色法， 二抗无法区分同一物种来源的未标记的一抗和
使用 Super-n-stain® 试剂盒标记的一抗。Super-n-stain®标记
抗体可以用作传统间接免疫荧光法检测后的三级染色。
UElandy 还提供生物素 Super-n-stain® 标记试剂盒、二次检
测使用的YF 染料标记的链霉亲和素或YF染料标记的单克
隆生物素抗体。
我们还提供酶标记和荧光蛋白标记的 Super-n-stain®试
剂盒，以及小配体标记试剂盒
准备工作
Super-n-stain® 抗体标记试剂盒适合标记 IgG。我们不
建议标记其他蛋白质，因为标记的 DOL（degree of labeling）
可能达不到较好值。Super-n-stain® 标记条件可能导致 IgM
抗体变性。
检查你的抗体与抗体兼容性指南。 如果你的一抗是商业
产品，请联系供应商以获取抗体浓度和配方。Super-n-stain®
标记不能用于标记天然抗血清或杂交瘤细胞株培养上清液。
使用蛋白质纯化步骤或商业化抗体纯化试剂盒，如 Pierce
Antibody Clean-Up Kit 纯化 IgG。
不含稳定剂的抗体溶液可以得到较好的标记结果， 而标
准的标记步骤可以兼容低浓度的BSA、明胶、Tris 和甘油，
标记液不受 NaN3的影响。对于标准的标记步骤（B），根
据需要标记的 IgG 的 ug数量选择试剂盒的规格。
Super-n-stain® 的优化步骤（C）是基于标记蛋白质总量
而不是 IgG 标记量来设计的。 优化步骤应用于含有过多稳定
蛋白质的抗体标记，溶液中的抗体标记也适用于优化步骤，
但您必须在标记前确定溶液中总蛋白的浓度（通过测量 280
nm吸光度估计蛋白质浓度）。试剂盒规格的选择根据您标
记抗体样本的总蛋白量来确定。优化步骤也可用于标记 IgG
量低于试剂盒 范围的样品， 通过添加稳定剂蛋白使总蛋
白量在试剂盒的标记范围之内。
含有低浓度 BSA 和明胶的标记抗体可能染色背景略强
于不含这些稳定剂的抗体。如果抗体标记在含有 BSA 或明
胶存在的情况下进行， 使用包含 1% BSA 或明胶的阻断和清
洗剂将大大降低染色背景。
去除非蛋白成分如 Tris、甘氨酸或甘油，可以用试剂盒
中提供的超滤管来纯化您的抗体，步骤如下（A）。
标记效率较高的抗体浓度为 0.5-1 mg/mL。超滤管可用
于浓缩抗体（注意：稳定蛋白质也将集中于超滤瓶）。为定
量未知浓度的抗体，UElandy提供 WonderOrange™ 蛋白质
定量试剂盒（W6006），一种高度敏感性的蛋白质荧光定量
测定试剂盒。如果不需要去除或浓缩抗体，则按照标准步骤
（B）或优化步骤（C）进行实验。
表 1. Super-n-stain® 抗体兼容性和标记步骤选择指南
组分 兼容性
NaN3 兼容
甘油
≤10%：标准步骤（部分 B）
＞10%：执行超滤（部分 A）
Tirs
≤20 mM：标准步骤（部分 B）
＞20 mM：执行超滤（部分 A）
甘氨酸 执行超滤（部分A）
BSA或明胶
≤4 倍 IgG μg 数：标准步骤（部分 B）
＞4 倍 IgG μg 数：优化步骤（部分 C）
腹水 优化步骤（部分 C）
血清 不兼容：纯化 IgG
杂交瘤细胞株培
养上清液
不兼容：纯化 IgG
A. 超滤步骤
重要：在您开始之前，对照表 1（Super-n-stain® 抗体
兼容性和标记步骤选择指南） 确定您的抗体在标记前是否需
要超滤。如果有必要，联系抗体厂家了解 IgG 和抗体稳定剂
的浓度。如果您的抗体不需要超滤，根据表 1选择合适的标
记步骤。超滤膜截留的分子量为10万，因此，小于 10 kDa
将可以通过膜，和分子大于 10 kDa 的，包括 IgG，将保留
在膜上（图 )1. 超滤管组成

注意不要用吸管触碰膜，这会撕裂或穿刺
膜，导致抗体损失。
超滤管性能
样本体积：500 μL最终浓缩体积：15 μL
滤液接收器体积：500 μL
滞留体积（膜/支持）：< 5 μL
1. 添加适量的抗体至超滤管膜中，小心不要触碰膜。
14000 g微型离心机离心 1 min， 检查有多少液体过滤至滤液
收集管（下方）。重复以上操作直到所有液体全部收集到过
滤收集管。去除收集管中的液体。
2. 对于浓缩抗体， 进行第3步。 对于纯化， 加入等体积1×PBS
至超滤管膜中。14000 g微型离心机离心直至液体过滤进入
滤液接收管。
3. 添加适当体积的 PBS至超滤管膜使得最终的抗体浓度为
0.5-1 mg/mL，在膜表面小心上下抽吸 PBS以重悬抗体。
4. 转移回收的抗体溶液至新离心管中。
5. 如果您使用优化标记步骤，保存超滤管来浓缩您标记后
的抗体。
图 1. 超滤管组成
B. 标准的 Super-n-stain® 标记步骤
重要：在您开始之前，对照表 1（Super-n-stain® 抗体
兼容性和标记步骤选择指南） 确定您的抗体组成和浓度是否
适用 Super-n-stain® 标记，以及哪种标记步骤适合您选择。
如果有必要， 联系抗体厂家了解您的抗体 IgG 和抗体稳定剂
的浓度。
1. 抗体浓度 0.5-1 mg/mL 是较合适的标记浓度。 如果抗体是
冻干形式或浓度更浓，用 PBS 溶解或稀释抗体。将需要标
记的抗体转移到干净的管子里。确保 IgG 的μg数匹配试剂
盒的标记范围。
2. Super-n-stain® 反应缓冲液和 Super-n-stain® 存储缓冲液
恢复室温。短暂离心试剂瓶将液体集中到底部。
3. 以 1:10 混合 10 × Super-n-stain® 反应缓冲溶液与抗体，
使抗体溶液最终形成 1×反应缓冲液（例如 9 μL 的抗体加 1
μL 10×反应缓冲液）。移液器上下吹吸混合。
4. 将上步的溶液全部转移至 YF 染料瓶中， 这里不需要检测
瓶中染料的含量，涡旋几秒钟。
5. 室温避光孵育 30 min。
6. 用存储缓冲液稀释标记的抗体，将全部标记抗体溶液转
移到存储缓冲液中，抗体现在就可以直接用于染色，YF 标
记抗体的浓度大约是起始抗体标记数量除以总体积。注意：
抗体存储缓冲液包含 2 mM NaN3。
7. 标记抗体 4℃避光至少可以稳定存储 6个月，此外，可以
将抗体分装成多份小包装在-20℃长期储存。注意：如果您
不喜欢使用抗体稀释缓冲液， 可以将溶液分装成多份小包装
-20℃储存，避免有反复冻融，标记抗体至少可以稳定储存
6个月。
C. Super-n-stain®优化标记步骤
重要：在您开始之前，对照表 1（Super-n-stain® 抗体兼容
性和标记步骤选择指南） 确定您的抗体组成和浓度是否适用
Super-n-stain® 标记，以及哪种标记步骤适合您选择。如果
有必要， 联系抗体厂家了解您的抗体 IgG 和抗体稳定剂的浓
度。
1. 蛋白（IgG 和稳定剂蛋白）浓度 0.5-1 mg/mL 是较合适的
标记浓度，如果需要，用 PBS 溶解或稀释。确保蛋白的μg
总量匹配试剂盒的标记范围， 如果待标记的 IgG 少于试剂盒
的 标记量， 加入BSA 使 BSA 和 IgG 的蛋白总量适配试
剂盒。
2. Super-n-stain® 反应缓冲液和 Super-n-stain® 存储缓冲液
恢复室温。短暂离心试剂瓶将液体集中到底部。
3. 以 1:10混合 10×Super-n-stain® 反应缓冲溶液与抗体，使
抗体溶液最终形成 1×反应缓冲液（例如9 μL 的抗体加 1 μL
10×反应缓冲液）。移液器上下吹吸混合。
4. 将上步的溶液全部转移至 YF 染料瓶中，这里不需要检
测瓶中染料的含量，涡旋几秒钟。
5. 室温避光孵育 30 min。
6. 可选择步骤：将全部标记抗体溶液转移到试剂盒的存储
缓冲液中，但这会使得 IgG 溶液被稀释，不利于后续实验，
将抗体转移到存储缓冲液，不进行额外稀释，按照下面的步
骤操作。注意：抗体存储缓冲液包含 2 mM NaN3。
7. 标记反应转移到超滤管膜上（或是之前抗体纯化使用后
保存的超滤管），离心机 14000 g 离心直到所有的液体过滤
到接收瓶中。
8. 添加适当体积的抗体储存液至超滤管膜，在膜表面小心
上下抽吸PBS以重悬抗体。 注意： 抗体存储缓冲液包含2 mM
NaN3。
9. 转移回收的抗体溶液至新管中。抗体可以直接用于染色。
10. 标记抗体 4℃避光至少可以稳定存储 6个月，此外，可
以将抗体分装成多份小包装在-20℃长期储存。
Super-n-stain® 抗体标记试剂盒常见问题
问题 解答
实验过程中没有纯化步骤，我如何将未标记上的荧光染料除去？
该问题描述了我们研发的关键因素，我们独特的染料、缓冲液组分以及完善的标记策略已经 地解决了这个问题，具体
机制涉及专利保护，不便透露。
Super-n-stain® 试剂盒可用于多色免疫标记吗，不同抗体间是否会发生
染料转移？
Super-n-stain® 试剂盒抗体与染料是共价结合方式，不存在染料扩散和转移现象。详细信息请参照上面产品说明部分。
Super-n-stain® 试剂盒可用于标记抗体以外的蛋白吗？ 该试剂盒是针对IgG 抗体标记优化设计的，不推荐用于标记其它蛋白。Super-n-stain® 标记条件可能会导致IgM 变性。
Super-n-stain® 试剂盒标记一抗和二抗的灵敏性是否一样？ 直接免疫荧光检测信号会弱于间接检测，详细信息请参照上面产品说明部分。
用标记二抗的间接标记相比，直接标记复合物有哪些优势？
直接免疫染色避免了二抗孵育和清洗的步骤，容许来自同一物种的多个抗体同时使用进行多色检测，可以使用来自同一物
种的抗体进行动物组织染色，从而避免了二抗的交叉反应。
Super-n-stain® 试剂盒与Invitrogen’s Zenon 抗体标记试剂盒相比，有哪
些优势？
主要优势：1. YF 染料与抗体共价结合避免了多重染色时染料转移和扩散现象；2. Super-n-stain® 复合物在储液中可稳定保
存几个月之久，而Zenon 标记物必须在 30min 内使用；3. Super-n-stain® 复合物体积更小些，因为染料直接与抗体结合，
而 Zenon 复合物与抗体片段配合使用；4. 无需进行 YF 染料与标记蛋白的比例优化，直接混合、染色即可；5. 无需进行
后染固定；6.没有种属特异性
Super-n-stain® 试剂盒与 Innova Bioscience Lightning-link 快速抗体标记
试剂盒相比，有哪些优势？
Super-n-stain® 试剂盒使用荧光更亮、光稳定性更好的 YF 染料，试剂盒规格更灵活，可提供至单个抗体标记反应。
什么是YF 染料？ YF 染料是一种水溶性较好、用于标记蛋白和核酸的小分子有机染料。我们可提供多达 20种的此类 YF 染料。
我应如何选择 Super-n-stain® 试剂盒？
每种 YF 染料，我们都提供三种不同抗体标记量的试剂盒，分别是：5-20 μg, 20-50 μg, 50-100 μg。对于没有稳定剂的抗体
标记，根据抗体规格，选择其中一种即可，含有稳定剂的抗体标记，请参考产品描述中的表1。
若待标记抗体总量适用于两种Super-n-stain® 试剂盒，我应如何选择？
例如： 标记50 μg抗体， 我应购买 50-100 μg 抗体标记试剂盒还是20-50
μg 的试剂盒？
遇到这种情况，两种规格都可以得到较好的结果，使用较小规格的效果更好。
如何选择染料与蛋白的比例获得较好的标记效果？
如果待标记的抗体量在试剂盒范围内，无需改变染料量或反应时间，因为Super-n-stain® 试剂盒中染料和反应缓冲液可以
确保较好的标记效果。
我可以拆分试剂盒组分，以便多次使用吗？ 不行，因为 Super-n-stain® 试剂盒已经优化至一个标记单位，我们不建议拆分试剂盒以标记多个抗体或多次使用。
抗体浓度是否影响标记效率？
Super-n-stain® 试剂盒较好的标记抗体浓度为 0.5-1 mg/mL，您可通过浓缩或稀释使待标记抗体达到上述浓度范围，小于或
超过该浓度范围，会导致标记效率过低或过多。
使用标记后的抗体进行免疫荧光染色未观察到荧光信号 与供应商联系，确保抗体组分、浓度在容许范围内。
使用标记后的抗体进行免疫荧光染色未观察到荧光信号怎么办？
与供应商联系，确保抗体组分、浓度在容许范围内。在直接标记前，应确定用于间接标记的一抗的敏感性和特异性。为了
得到与间接标记相同的信号强度，直接标记时需要使用更高浓度的一抗，更多信息请参考产品应用部分。共价标记可能会
影响某些抗体的反应活性。可以通过实验确定是否是这一因素的原因，即使用 Super-n-stain® 标记的一抗和荧光标记的二
抗进行间接免疫染色，以确定 Super-n-stain® 标记后的一抗是否仍具有反应活性。如果有兼容 YF 染料的激发/发射波长的
荧光读胶仪或扫描仪，可以通过 SDS-PAGE 电泳确定抗体是否标记上染料，取 0.1-0.5 μg 标记抗体进行变性 SDS-PAGE
电泳，然后进行凝胶拍照，你应该可以观察到IgG 的55 kDa 的重链和 25 kDa 的轻链对应的两条荧光条带。
本产品仅用于科研

532 Antibody Labeling Kit（532抗体标记试剂盒）